分析型液相色譜儀作為生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)、環(huán)境污染物分析、石油化工成分分離等領(lǐng)域的核心設(shè)備，憑借全觸摸式操作屏的便捷性和精準(zhǔn)的分析能力，成為實(shí)驗(yàn)室的工具。但在長期使用中，受流動(dòng)相配置、樣品處理、設(shè)備損耗等因素影響，儀器易出現(xiàn)各類故障，不僅影響檢測(cè)效率，還可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差。本文針對(duì)分析型液相色譜儀6 大高頻故障，從原因分析到實(shí)操處理步驟逐一拆解，助力實(shí)驗(yàn)室人員快速排查問題，保障儀器穩(wěn)定運(yùn)行，提升檢測(cè)結(jié)果可靠性。?

一、分析型液相色譜儀柱壓過高怎么辦？（高頻故障）?

柱壓過高是分析型液相色譜儀使用中常見的問題之一，若不及時(shí)處理，可能導(dǎo)致色譜柱損壞，影響分離效果。?

原因分析?

緩沖液鹽分析出沉積：實(shí)驗(yàn)中常用的磷酸鹽、乙酸銨等緩沖液，若未及時(shí)沖洗或環(huán)境溫度過低，易在色譜柱內(nèi)部析出鹽分，堵塞填料孔隙，導(dǎo)致柱壓飆升。?

樣品污染物沉積：樣品前處理不徹底（如未過濾、離心不充分），其中的蛋白質(zhì)、顆粒物等雜質(zhì)會(huì)附著在色譜柱柱頭，逐漸形成污染層，阻礙流動(dòng)相流通。?

實(shí)操處理措施?

針對(duì)鹽分析出：先將柱溫升至 40～50℃（避免高溫?fù)p壞色譜柱，需參考柱子耐受范圍），用純水以 0.2～0.5mL/min 的低速正向沖洗 30～60 分鐘，待柱壓明顯下降后，降至常溫繼續(xù)用純水洗 1 小時(shí)，后切換為純甲醇沖洗 30 分鐘，完成柱子再生。?

針對(duì)樣品污染：需反向沖洗（將色譜柱進(jìn)出口反向連接，避免污染物進(jìn)一步深入柱內(nèi)），先用純水以 0.3mL/min 沖洗 40 分鐘，再換純甲醇沖洗 30 分鐘；之后用甲醇 - 異丙醇混合液（體積比 4:6）沖洗 20 分鐘（異丙醇可溶解強(qiáng)疏水性雜質(zhì)），后依次用甲醇、純水洗各 20 分鐘，恢復(fù)正向連接后用甲醇沖洗 30 分鐘，靜置備用。?

二、分析型液相色譜儀流動(dòng)相有氣泡溢出？解決步驟來了?

流動(dòng)相含氣泡會(huì)導(dǎo)致基線漂移、峰形異常，嚴(yán)重時(shí)中斷液體流動(dòng)，影響檢測(cè)連續(xù)性，多與流動(dòng)相過濾器維護(hù)不當(dāng)有關(guān)。?

原因分析?

流動(dòng)相過濾器（通常為 0.22μm 或 0.45μm 濾膜）長期浸泡在乙酸銨、磷酸二氫鉀等緩沖液中，若實(shí)驗(yàn)后未及時(shí)清洗，緩沖液中的微生物會(huì)大量繁殖，形成霉菌團(tuán)堵塞濾膜孔隙，導(dǎo)致流動(dòng)相流通時(shí)產(chǎn)生負(fù)壓，吸入空氣形成氣泡。?

實(shí)操處理措施?

拆卸過濾器清洗：將過濾器從流路中拆下，放入 5% 硝酸溶液中（硝酸可殺滅霉菌并溶解雜質(zhì)），超聲清洗 15～20 分鐘（功率 200～300W，避免濾膜破損）；若污染嚴(yán)重，可在 5% 硝酸中浸泡 12～36 小時(shí)，期間每隔 8 小時(shí)搖晃一次。?

恢復(fù)流路脫氣：用純水反復(fù)沖洗過濾器至無硝酸殘留（可用 pH 試紙檢測(cè)沖洗液，呈中性即可），重新安裝到流路中；開啟儀器 “Purge” 脫氣功能，以 3～5mL/min 的流速?zèng)_洗流路 10～15 分鐘，觀察氣泡是否消失；后打開泄壓閥，啟動(dòng)泵用純水以 1mL/min 沖洗過濾器 1 小時(shí)，確保流路通暢。?

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三、分析型液相色譜儀無壓力指示且無液體流動(dòng)？排查這 2 點(diǎn)?

無壓力、無液體流動(dòng)屬于緊急故障，會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中斷，需優(yōu)先排查泵體及密封部件。?

原因分析?

泵密封墊圈磨損：泵體中的密封墊圈（通常為氟橡膠材質(zhì)）長期接觸有機(jī)相（如甲醇、乙腈）和緩沖液，易發(fā)生老化、變形或磨損，導(dǎo)致流動(dòng)相泄漏，無法建立壓力。?

泵體進(jìn)入大量空氣：換流動(dòng)相時(shí)未排氣、流動(dòng)相液位過低導(dǎo)致泵吸入空氣，或長期閑置后泵內(nèi)殘留空氣，空氣在泵腔內(nèi)形成 “氣鎖”，阻礙液體推動(dòng)，無法產(chǎn)生壓力。?

實(shí)操處理措施?

密封墊圈磨損處理：關(guān)閉儀器電源，拆卸泵頭部件（需參考儀器說明書，避免損壞精密零件），取出舊墊圈，用無塵紙蘸甲醇擦拭泵頭接觸面，更換同型號(hào)新墊圈（安裝時(shí)確保無偏移、無褶皺），重新組裝后啟動(dòng)泵，用純甲醇以 1mL/min 流速運(yùn)行 30 分鐘，檢查是否泄漏。?

泵體排氣處理：在泵出口處連接一個(gè) 50mL 玻璃注射器（去掉針頭，確保接口密封），開啟泵以 0.5mL/min 流速運(yùn)行，同時(shí)緩慢拉動(dòng)注射器活塞，將泵腔內(nèi)的空氣抽出；待注射器內(nèi)無氣泡后，關(guān)閉泵，取下注射器，重啟泵用純甲醇沖洗流路 20 分鐘，觀察壓力是否恢復(fù)正常。?

四、分析型液相色譜儀壓力波動(dòng)大、流量不穩(wěn)定？這樣解決?

壓力波動(dòng)大、流量不穩(wěn)定會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移、峰面積重復(fù)性差，多與系統(tǒng)氣泡或單向閥污染有關(guān)。?

原因分析?

系統(tǒng)存在空氣：流動(dòng)相脫氣不充分（如未使用在線脫氣機(jī)、超聲脫氣時(shí)間不足）、流路接口松動(dòng)，或流動(dòng)相瓶中液位過低，導(dǎo)致空氣持續(xù)進(jìn)入系統(tǒng)，造成壓力忽高忽低。?

單向閥污染卡塞：單向閥內(nèi)的寶石球與閥座是控制液體單向流動(dòng)的核心部件，若流動(dòng)相中的微小顆粒、鹽類雜質(zhì)卡在兩者之間，會(huì)導(dǎo)致單向閥密封不嚴(yán)，液體回流，引發(fā)壓力波動(dòng)和流量不穩(wěn)定。?

實(shí)操處理措施?

系統(tǒng)排氣與檢查：確保流動(dòng)相經(jīng)超聲脫氣 20～30 分鐘（或開啟在線脫氣機(jī)），流動(dòng)相瓶液位保持在 1/2 以上；檢查流路所有接口（如管路接頭、進(jìn)樣閥接口），用扳手輕輕擰緊（避免過度用力損壞螺紋）；開啟泵以 2mL/min 流速運(yùn)行，觀察壓力曲線，若仍波動(dòng)，進(jìn)行下一步。?

單向閥清洗：關(guān)閉泵電源，拆下單向閥（注意區(qū)分進(jìn)出口方向，做好標(biāo)記），放入盛有丙酮的燒杯中（丙酮可溶解多數(shù)有機(jī)雜質(zhì)和鹽類），超聲清洗 10～15 分鐘；取出后用純甲醇沖洗干凈，晾干后按原方向安裝，重啟泵用純甲醇運(yùn)行 30 分鐘，觀察壓力是否平穩(wěn)。?

五、分析型液相色譜儀色譜峰分叉？原因與修復(fù)方法?

色譜峰分叉是影響檢測(cè)準(zhǔn)確性的常見問題，會(huì)導(dǎo)致組分定性錯(cuò)誤、定量偏差，主要與色譜柱狀態(tài)相關(guān)。?

原因分析?

色譜柱污染嚴(yán)重：長期進(jìn)樣后，樣品中的強(qiáng)吸附性雜質(zhì)（如色素、大分子有機(jī)物）未被及時(shí)沖洗，在色譜柱內(nèi)形成固定污染區(qū)，導(dǎo)致部分組分在污染區(qū)和正常填料區(qū)同時(shí)保留，出現(xiàn)峰分叉。?

柱頭填料塌陷：色譜柱長期使用或受到壓力沖擊（如突然升高流速、柱壓過高），柱頭的填料會(huì)出現(xiàn)松動(dòng)、塌陷，形成凹陷區(qū)域，流動(dòng)相流經(jīng)時(shí)產(chǎn)生 “死體積”，導(dǎo)致組分峰分裂。?

實(shí)操處理措施?

色譜柱污染修復(fù)：若為反相色譜柱（如 C18 柱），先用純甲醇沖洗 30 分鐘，再用甲醇 - 水（10:90）沖洗 40 分鐘，接著用甲醇 - 乙腈（50:50）沖洗 30 分鐘，后用純甲醇沖洗 30 分鐘；若污染嚴(yán)重，可加入 0.1% 甲酸水溶液沖洗（增強(qiáng)雜質(zhì)溶解性），但需注意柱子是否耐受酸性流動(dòng)相。?

柱頭填料修復(fù)：需在超凈環(huán)境下操作，先拆下色譜柱柱頭螺母，用無塵棉簽輕輕擦拭柱頭表面，去除松動(dòng)的污染填料；取少量同型號(hào)色譜柱填料（顆粒度一致），用甲醇調(diào)成糊狀，緩慢滴加到柱頭凹陷處，邊滴加邊用不銹鋼桿（頂端磨平）輕輕壓實(shí)，確保填料與原有填料齊平；補(bǔ)填完成后，用純甲醇沖洗柱頭 10 分鐘，重新安裝柱頭螺母，用純甲醇正向沖洗柱子 1 小時(shí)，待峰形恢復(fù)后再使用。?

六、分析型液相色譜儀峰面積重復(fù)性差？關(guān)鍵排查點(diǎn)?

峰面積重復(fù)性差會(huì)導(dǎo)致定量結(jié)果不可靠，影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可信度，多與進(jìn)樣系統(tǒng)操作或部件損耗有關(guān)。?

原因分析?

進(jìn)樣閥漏液：進(jìn)樣閥的密封墊圈（如轉(zhuǎn)子密封墊）長期使用后磨損，或進(jìn)樣時(shí)操作不當(dāng)（如閥切換過快、用力過猛），導(dǎo)致樣品在進(jìn)樣過程中泄漏，實(shí)際進(jìn)入色譜柱的樣品量不一致。?

進(jìn)樣操作不當(dāng)：進(jìn)樣針未完全插入進(jìn)樣閥的定量環(huán)接口（即 “未插到位”），導(dǎo)致樣品未全部注入定量環(huán)；或樣品量不足（如定量環(huán)為 20μL，僅注入 10μL 樣品），且未進(jìn)行 “過載進(jìn)樣” 操作，導(dǎo)致實(shí)際進(jìn)樣量波動(dòng)。?

實(shí)操處理措施?

進(jìn)樣閥維護(hù)：關(guān)閉儀器，拆卸進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)子密封墊，用甲醇清洗進(jìn)樣閥內(nèi)部，更換同規(guī)格新密封墊（安裝時(shí)確保位置正確，避免偏移）；重新組裝后，用微量注射器吸取純甲醇，注入進(jìn)樣閥，切換閥門至 “INJECT” 位，觀察是否有漏液，若無漏液，進(jìn)行下一步驗(yàn)證。?

規(guī)范進(jìn)樣操作：確保進(jìn)樣針完全插入進(jìn)樣閥接口（插入時(shí)感到輕微阻力即可，避免暴力插入損壞接口）；若使用定量環(huán)進(jìn)樣，樣品量需為定量環(huán)體積的 2～3 倍（如 20μL 定量環(huán)，注入 40～60μL 樣品），確保定量環(huán)充滿；注射樣品后，以平穩(wěn)速度將閥從 “LOAD” 位切換到 “INJECT” 位（切換時(shí)間控制在 1 秒內(nèi)，避免樣品擴(kuò)散）；同時(shí)，避免使用濃度過高的樣品（建議濃度控制在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)），防止樣品在定量環(huán)內(nèi)吸附，影響重復(fù)性。?

分析型液相色譜儀常見故障匯總表

分析型液相色譜儀的穩(wěn)定運(yùn)行依賴日常規(guī)范操作與定期維護(hù)，上述 6 類常見故障多可通過 “提前預(yù)防 + 及時(shí)處理” 規(guī)避。建議實(shí)驗(yàn)室建立儀器使用臺(tái)賬，記錄每次實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相配置、樣品處理方式、柱壓變化等數(shù)據(jù)；實(shí)驗(yàn)后及時(shí)用合適的溶劑沖洗流路和色譜柱，定期檢查泵密封件、單向閥、進(jìn)樣閥等易損部件，延長儀器使用壽命，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可靠性。若故障無法通過上述方法解決，建議聯(lián)系儀器廠商專業(yè)售后人員，避免自行拆解精密部件導(dǎo)致二次損壞。

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