在日常實(shí)驗(yàn)分析中，高效液相色譜儀（HPLC）是許多實(shí)驗(yàn)室操作人員的 “核心搭檔”—— 它能處理非揮發(fā)性、熱不穩(wěn)定的樣品，無論是復(fù)雜體系的微量成分分離，還是生化物質(zhì)的活性保留，都離不開它的高分辨率與高靈敏度。但很多時(shí)候，大家專注于樣品前處理、流動(dòng)相配制，卻容易忽略周圍環(huán)境的細(xì)微變化 —— 這些變化可能悄悄導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差、重復(fù)性差，甚至讓儀器 “罷工”。下面結(jié)合咱們?nèi)粘２僮鲌?chǎng)景，聊聊環(huán)境因素的影響及該注意的細(xì)節(jié)，幫你避開隱形坑，讓結(jié)果更靠譜。?

一、溫度波動(dòng)：藏在數(shù)據(jù)里的 “隱形干擾”?

HPLC對(duì)溫度的敏感，體現(xiàn)在每一步分析里：流動(dòng)相粘度會(huì)隨溫度變化，色譜柱的保留特性會(huì)受溫度變化的影響，連檢測(cè)器的響應(yīng)都可能跟著一起“波動(dòng)”—— 終表現(xiàn)就是保留時(shí)間飄移、峰形變寬，甚至目標(biāo)峰沒分開。?

咱們操作時(shí)要注意這些細(xì)節(jié)：?

室溫保持穩(wěn)定，別忽冷忽熱：夏天空調(diào)頻繁啟停、冬天靠近暖氣，都可能讓基線飄動(dòng)。建議把儀器放遠(yuǎn)離門窗、空調(diào)通風(fēng)口的位置，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在20–30℃，一天內(nèi)波動(dòng)別超2–3℃。如果夏天室溫超30℃，記得提前檢查一下流動(dòng)相，因?yàn)闇囟雀呷菀桩a(chǎn)生氣泡，可以先把流動(dòng)相超聲幾分鐘，或放實(shí)驗(yàn)室平衡1小時(shí)再用，避免上機(jī)后泵壓不穩(wěn)。?

柱溫箱溫度確定：每次開機(jī)先校準(zhǔn)柱溫箱溫度，比如設(shè)定30℃，等10分鐘后看實(shí)際顯示是否穩(wěn)定。如果柱溫箱失控，分配系數(shù)會(huì)變，分離度肯定受影響。之前有同事遇到過柱溫箱風(fēng)扇故障，沒及時(shí)發(fā)現(xiàn)，結(jié)果同一樣品連續(xù)進(jìn)樣，保留時(shí)間差了2分鐘，后來排查才知道是溫度沒穩(wěn)住。??

二、濕度與塵埃：儀器的 “慢性損耗源”?

HPLC 的光學(xué)組件（比如 UV 檢測(cè)器的氘燈、流通池）和電路系統(tǒng)，特別怕潮、怕臟。高濕度會(huì)讓光學(xué)元件發(fā)霉，塵埃會(huì)堵管路，后要么靈敏度下降，要么泵壓飆高。?

日常要做好這幾點(diǎn)：?

濕度控制別馬虎：實(shí)驗(yàn)室濕度好低于 60%，梅雨季可以開除濕機(jī)。之前有個(gè)實(shí)驗(yàn)室因?yàn)闈穸瘸?70%，UV 檢測(cè)器的流通池內(nèi)壁結(jié)了一層霧，基線噪聲變大，清洗了好幾次才恢復(fù)。另外，儀器不用時(shí)記得蓋防塵罩，每周擦一次儀器外殼，特別是進(jìn)樣口周圍，別讓樣品殘留或灰塵掉進(jìn)去。?

有害氣體要及時(shí)排：流動(dòng)相里的甲醇、乙腈揮發(fā)后，會(huì)產(chǎn)生腐蝕性蒸氣，長(zhǎng)期積累會(huì)腐蝕泵的密封件和管路。所以每次配流動(dòng)相、換流動(dòng)相時(shí)，一定要在通風(fēng)櫥里操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后別馬上關(guān)通風(fēng)柜，讓它再抽 10 分鐘，把殘留的蒸氣排干凈。如果實(shí)驗(yàn)室沒有通風(fēng)柜，至少開窗通風(fēng) 30 分鐘，別讓有害氣體在室漂浮。?

三、振動(dòng)與電磁干擾：容易被忽略的 “信號(hào)殺手”?

輸液泵需要穩(wěn)定的環(huán)境才能精準(zhǔn)送液，檢測(cè)器的信號(hào)也怕干擾。如果儀器旁邊有離心機(jī)、空調(diào)壓縮機(jī)，或者靠近電梯、大功率電機(jī)，振動(dòng)會(huì)讓基線波動(dòng)，電磁干擾會(huì)讓信號(hào) “亂跳”。?

擺放和供電要注意：?

儀器臺(tái)要穩(wěn)、要“獨(dú)立”：別把HPLC和離心機(jī)、振蕩器放同一個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)。之前有同事圖方便，把離心機(jī)放 HPLC 旁邊，結(jié)果離心時(shí)基線出現(xiàn)雜峰，后來把離心機(jī)移走，基線馬上平穩(wěn)了。實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)當(dāng)是固定的，別用可移動(dòng)的小推車，避免輕微晃動(dòng)影響輸液精度。?

電源要“專用”：給HPLC配一個(gè)穩(wěn)壓電源，別和其他大功率設(shè)備（比如電熱板、真空干燥箱）共用一個(gè)插座。之前有個(gè)實(shí)驗(yàn)室因?yàn)殡妷翰环€(wěn)，輸液泵的流速忽快忽慢，進(jìn)樣后峰面積重復(fù)性差。換了穩(wěn)壓電源后，問題才得以解決。另外，儀器的接地要做好，避免電磁干擾影響檢測(cè)器信號(hào)。

四、光線與氣流：光學(xué)檢測(cè)器的 “天敵”?

UV 檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器對(duì)光很敏感，強(qiáng)光會(huì)增加基線噪聲；而氣流直吹儀器，會(huì)讓局部溫度變化，保留時(shí)間就沒法重復(fù)。?

擺放位置要選對(duì)：?

避免陽光直射：實(shí)驗(yàn)室窗戶要裝窗簾，特別是朝南的窗戶，夏天陽光強(qiáng)，直接照在檢測(cè)器上，基線會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則波動(dòng)。儀器的顯示屏盡量不要對(duì)著光線來源，不然操作時(shí)看屏幕會(huì)反光，也容易誤觸按鈕。?

氣流別直吹儀器：實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)口和空調(diào)出風(fēng)口別對(duì)著HPLC，之前有個(gè)實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)口剛好在儀器上方，開通風(fēng)時(shí)氣流直吹柱溫箱，導(dǎo)致柱溫波動(dòng)，保留時(shí)間重復(fù)性差。后來調(diào)整了通風(fēng)口方向，問題就解決了。如果通風(fēng)口沒法調(diào)，就在儀器上方裝個(gè)擋風(fēng)板，讓氣流繞開儀器。?

五、潔凈度與空間：純度分析的“質(zhì)量保證”?

做痕量分析時(shí)，空氣中的顆粒、揮發(fā)性有機(jī)物，都可能成為 “污染源”，比如顆粒會(huì)堵進(jìn)樣針、污染流動(dòng)相，揮發(fā)性有機(jī)物會(huì)被柱子吸附，影響檢測(cè)結(jié)果。?

日常管理要到位：?

流動(dòng)相和樣品要 “防污染”：配流動(dòng)相時(shí)用 0.22μm 濾膜過濾，樣品也要過濾（除非是無顆粒的純?nèi)芤海?，濾膜別重復(fù)用，避免交叉污染。易氧化的流動(dòng)相（比如四氫呋喃），每次用前要充氮，沒用完的密封好放冰箱，別讓它和空氣長(zhǎng)時(shí)間接觸，不然會(huì)降解，影響分離效果。?

儀器周圍要 “留空間”：HPLC 的側(cè)面和后面要留至少 10 厘米的空間，方便散熱和維護(hù)，別把試劑瓶、樣品盒堆在儀器旁邊，一來容易碰倒，二來可能遮擋散熱孔，導(dǎo)致儀器內(nèi)部溫度升高。每周清潔一次空調(diào)濾網(wǎng)，避免灰塵被空調(diào)吹到儀器里，堵管路或影響電路。?

表1：HPLC 日常生產(chǎn)中關(guān)鍵的檢查和維護(hù)內(nèi)容表

后提醒一句：每次開機(jī)前，花2分鐘檢查一下環(huán)境，例如摸一下柱溫箱是否正常，看一下濕度計(jì)讀數(shù)，聽一下輸液泵有沒有異常聲音。這些看似不經(jīng)意的習(xí)慣，卻能幫你減少很多不必要的麻煩，讓HPLC一直保持“好狀態(tài)”。