簡(jiǎn)介

維生素是人體內(nèi)各種代謝功能所必需的微量營(yíng)養(yǎng)素。維生素可分為水溶性和脂溶性維生素。脂溶性維生素 (FSV) 主要由維生素 A、D、E 和 K 組成，儲(chǔ)存在肝臟和脂肪組織中，消除速率比水溶性維生素慢。因此，人體不需要經(jīng)常補(bǔ)充 FSV。FDA 建議人體 FSV 推薦攝入量 / 耐受量見表 1。

由于脂溶性維生素的溶解度有限，食品、食品添加劑和補(bǔ)充劑中的 FSV 一般主要采用正相液相色譜法進(jìn)行分析，在樣品制備和后續(xù)色譜分析中通常使用二氯甲烷作為主要有機(jī)溶劑。但是由于與所用溶劑有關(guān)的固有危害，以及較高處置成本，這種方法可能并不理想。

當(dāng)使用反相液相色譜法 (RPLC) 時(shí)，將脂溶性維生素溶解到適當(dāng)溶劑中是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。還必須考慮到任何額外的樣品步驟將增加分析時(shí)間。此外，通過 RPLC 分析脂溶性維生素時(shí)，由于二氯甲烷常被用作樣品稀釋劑，所以避免因溶劑效應(yīng)而導(dǎo)致的早期洗脫物出現(xiàn)色譜峰變形是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。

基于上述考慮，本文提出了分析物在 100% 二氯甲烷中溶解 / 稀釋并通過反相 UHPLC-MS/MS 分析 FSV 的一種方法。

實(shí)驗(yàn)

溶劑和標(biāo)準(zhǔn)品

使用的所有溶劑、試劑和稀釋劑均為 HPLC 級(jí)或更高。

所有稀釋均使用 HPLC 級(jí)二氯甲烷。

FSV 標(biāo)準(zhǔn)品，包括維生素 A 醋酸酯 (視黃醇醋酸酯)、D3 (膽鈣化醇)、D2 (麥角鈣化醇)、K2 (甲基萘醌)、E (生育酚)、E 醋酸酯 (生育酚醋酸酯)、K1 (葉洛醌) 和 A 棕櫚酸酯 (視黃醇棕櫚酸酯)，均從密蘇里州圣路易 Sigma-Aldrich Inc. 獲得。使用二氯甲烷制備 100μg/mL FSV 工作標(biāo)準(zhǔn)品。為了防止標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定，所有儲(chǔ)備和工作標(biāo)準(zhǔn)品均冷藏 (4°C) 存儲(chǔ)，并且只使用 2mL 琥珀色 LC 小瓶。

硬件 / 軟件

色譜分離使用依利特科技 UHPLC 系統(tǒng)及依利特科技 MS2 Vertical 9100 液相質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測(cè)器。所有儀器控制、分析和數(shù)據(jù)處理均使用軟件平臺(tái)進(jìn)行。

方法參數(shù)

LC 和 MS/MS 方法參數(shù)分別見表 2、表 3、表 4。

結(jié)果和討論

如圖 1 所示，在不到 15 分鐘的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)了 8 種維生素良好色譜分離，如圖 2 所示，5 次重復(fù)檢測(cè)的重疊顯示了出色的色譜重現(xiàn)性。三組 10 次重復(fù)進(jìn)樣使用二氯甲烷制備的 100μg/mL FSV 標(biāo)準(zhǔn)品，所有峰面積的 % RSD 均小于 3%(表 5)。這表明進(jìn)樣之間擁有出色的重現(xiàn)性。

結(jié)論

通過減少 LC 進(jìn)樣量和提高所使用色譜柱的內(nèi)徑，反相色譜法可直接應(yīng)用于二氯甲烷中制備的脂溶性維生素分析，并且不會(huì)因溶劑效應(yīng)導(dǎo)致的早期洗脫分析物色譜峰失真而造成色譜性能損失。獲得的面積 % RSD<3%，表明方法重現(xiàn)性出色。結(jié)果表明，該方法適用于脂溶性維生素的反相 UHPLC-MS/MS 分析。

參考

U.S. Food and Drug Administration (FDA), Guidance for Industry: A Food Labeling Guide (14. Appendix F), http://www.fda.gov/Food/GuidanceRegulation/GuidanceDocumentsRegulatoryInformation/labelingnutrtion/ucm064928.htm

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上述內(nèi)容為《使用反相 UHPLC-MS/MS 分析保健食品中的脂溶性維生素》核心摘要，完整文檔包含詳細(xì)實(shí)驗(yàn)操作步驟、譜圖原圖解析、方法驗(yàn)證全數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)品配制細(xì)則，可點(diǎn)擊鏈接下載或聯(lián)系技術(shù)支持獲?。?/span>

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