高效液相色譜儀是一款以用戶為核心的智能化分析儀器，不僅具備常規(guī)高效液相色譜的所有基本性能，還能兼容反控液相色譜工作站和通用色譜工作站。其新穎的外觀設(shè)計(jì)，加上更高的可靠性、穩(wěn)定性和易操作性，使其成為實(shí)驗(yàn)室分析的理想選擇。

高效液相色譜儀主要由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)五大核心部分組成。下面將帶您詳細(xì)了解這五大系統(tǒng)的功能與特點(diǎn)。

表1.核心系統(tǒng)關(guān)鍵信息總覽

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一、進(jìn)樣系統(tǒng)

進(jìn)樣系統(tǒng)通常采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣閥來完成樣品引入操作，能夠保證進(jìn)樣量的高度一致性。這種恒定的進(jìn)樣方式顯著提高了分析結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，對于需要高精度數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn)尤為重要。

二、輸液系統(tǒng)

輸液系統(tǒng)由高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分組成。高壓泵的工作壓強(qiáng)范圍通常為1.47~4.4×10?Pa，具有可調(diào)節(jié)且穩(wěn)定的流速特性。高壓環(huán)境下的流動(dòng)相能夠有效降低樣品在色譜柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，同時(shí)加快樣品在柱內(nèi)的移動(dòng)速度，這不僅有助于提高分離分辨率，還能更好地保持樣品的生物活性和回收效率。流動(dòng)相貯存器和梯度儀的配合使用，使流動(dòng)相能夠根據(jù)固定相和樣品的特性進(jìn)行調(diào)整，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、pH值等參數(shù)。

三、分離系統(tǒng)

分離系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等關(guān)鍵組件。色譜柱通常長度為10~50cm（需要時(shí)可使用連接管串聯(lián)多根色譜柱），內(nèi)徑為2~5mm，由優(yōu)質(zhì)不銹鋼、厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成。

柱內(nèi)填充有直徑為5~10μm的固定相，由基質(zhì)和固定液構(gòu)成。固定相基質(zhì)通常采用機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠，具有惰性好、多孔性強(qiáng)和比表面積大的特點(diǎn)。這些基質(zhì)表面經(jīng)過機(jī)械涂漬或化學(xué)偶聯(lián)處理，可連接磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或不同長度碳鏈的烷基等功能基團(tuán)。

這種精密的固定相設(shè)計(jì)對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)具有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，能夠特異性地分離成纖維細(xì)胞中的特定糖蛋白。

固定相基質(zhì)顆粒微小，使柱床能夠達(dá)到高度均勻和致密狀態(tài)，有效降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)。同時(shí)，微孔淺、傳質(zhì)路徑短的特點(diǎn)有助于縮小譜帶寬度，提高分離分辨率。根據(jù)塔板理論，基質(zhì)粒度越小，理論塔板數(shù)N越大，分離效率越高。恒溫器可將溫度從室溫調(diào)節(jié)至60℃，通過改善傳質(zhì)速度來縮短分析時(shí)間，進(jìn)一步提升色譜柱的分離效率。

四、檢測系統(tǒng)

高效液相色譜儀常用的檢測器主要有三種：

表2.常用檢測器簡要對比

紫外檢測器

適用于對紫外光或可見光有吸收的樣品檢測。其優(yōu)勢在于應(yīng)用范圍廣（可用于蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等多種物質(zhì)）、靈敏度高（檢測下限達(dá)10?1?g/mL）、線性范圍寬，同時(shí)對溫度和流速變化不敏感，適合梯度洗脫樣品的檢測。

示差折光檢測器

適用于所有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分檢測，特別常用于糖類化合物的分析。這種檢測器通用性強(qiáng)、操作簡便，但靈敏度相對較低（檢測下限為10??g/mL），且對流動(dòng)相變化敏感，因此不適用于痕量分析和梯度洗脫檢測。

熒光檢測器

專門適用于具有熒光特性的有機(jī)化合物檢測，如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等。其大特點(diǎn)是靈敏度極高（檢測下限達(dá)10?12~10?1?g/mL），既適合痕量分析，也適用于梯度洗脫樣品的檢測。

五、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)負(fù)責(zé)對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、存儲(chǔ)、顯示、打印和進(jìn)一步處理，確保樣品的分離、制備或鑒定工作能夠準(zhǔn)確、高效地完成?，F(xiàn)代數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)通常配備智能化的色譜工作站，提供友好的用戶界面和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，大大提升了實(shí)驗(yàn)工作的便捷性和結(jié)果的可信度。

表3.色譜柱選型簡要指南?

各系統(tǒng)核心作用

通過以上五大系統(tǒng)的協(xié)同工作，高效液相色譜儀能夠?yàn)閷?shí)驗(yàn)室提供可靠、精準(zhǔn)的分析結(jié)果，滿足各種復(fù)雜的分析需求。

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